BD biocoat 基質(zhì)膠和細(xì)胞檢測(cè)系統(tǒng)

產(chǎn)品貨號(hào)：354230  354234  356230  356231  356234  356235  356237       

儲(chǔ)存和運(yùn)輸：-20℃儲(chǔ)存，干冰運(yùn)輸。

操作指南：

BD采用技術(shù)，從富含胞外基質(zhì)蛋白的EHS小鼠腫瘤中分離出BD Matrigel 基底膜基質(zhì)，其主要成分由層粘連蛋白，IV型膠原，巢蛋白，硫酸肝素糖蛋白等組成，還包含生長(zhǎng)因子和基質(zhì)金屬蛋白酶等。BD Matrigel 基底膜基質(zhì)在室溫條件下，聚合形成具有生物學(xué)活性的三維基質(zhì)，模擬體內(nèi)細(xì)胞基底膜的結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和功能，有利于體外細(xì)胞的培養(yǎng)和分化，以及對(duì)細(xì)胞形態(tài)、生化功能、遷移、侵染和基因表達(dá)的研究。

BD Matrigel 基底膜基質(zhì)形成的三維培養(yǎng)機(jī)制，可促進(jìn)上皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、Sertoli細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、甲狀腺細(xì)胞及毛囊細(xì)胞等的貼壁與分化。同時(shí)，Matrigel 還能影響乳腺上皮細(xì)胞的蛋白表達(dá)，支持外周神經(jīng)的新生和牛輸卵管上皮細(xì)胞的分化，高濃度的Matrigel 適用于研究體內(nèi)血管生成和腫瘤細(xì)胞遷移及腫瘤模型的建立等。

Matrigel 基質(zhì)會(huì)有色差變化（淡黃色到深紅色），是由于酚紅和碳酸氫鹽與CO2作用引起的。但是與5%CO2平衡后色差即會(huì)減少。凍融后，輕輕搖晃試劑瓶使Matrigel分散均勻。所有操作均需在無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行。試劑瓶瓶蓋可用70%乙醇擦拭，并自然干燥。應(yīng)使用預(yù)冷的移液器以保證Matrigel呈勻漿狀。細(xì)胞可在0.5mm厚度的Matrigel基質(zhì)層表面生長(zhǎng)，也可在1mm厚度的Matrigel三維基質(zhì)內(nèi)生長(zhǎng)。過(guò)度稀釋的Matrigel會(huì)形成非膠質(zhì)的蛋白層，也可以用于細(xì)胞貼壁，但不能用于細(xì)胞的分化研究。

注意：

1.可將凍融后的Matrigel分裝在多個(gè)小管，所有分裝均需用預(yù)冷的凍存管，迅速冷凍并保存，避免多次凍融。

2.Matrigel在22-35℃溫度環(huán)境下快速成膠，因此溶解時(shí)在4℃冰上Overnight凍融（4℃時(shí)會(huì)隨著溫度的上升部分成膠）。所有用品在使用前需置于冰浴，必須使用預(yù)冷的移液管、吸頭及小管操作Matrigel。成膠后的Matrigel可以在4℃24-48小時(shí)后重新呈液態(tài)。

推薦包被與成膠方法：

注意：為了保證Matrigel基質(zhì)膜的成膠性能與穩(wěn)定性，稀釋濃度不應(yīng)低于1:3，可用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋，Matrigel成膠后立即使用。

薄膠成膠方法：

凍融后，用預(yù)冷的移液槍頭混勻Matrigel基質(zhì)成勻漿狀。

將需要使用的培養(yǎng)板置于冰上，加入濃度為50ul/cm2生長(zhǎng)面積的Matrigel基質(zhì)。

在37℃放置30分鐘，即可使用。

厚膠成膠方法：

凍融后，用預(yù)冷的移液槍頭混勻Matrigel基質(zhì)成勻漿狀。將需要使用的培養(yǎng)板置于冰浴，將培養(yǎng)的細(xì)胞與Matrigel基質(zhì)混合，用移液槍頭使其懸浮于基質(zhì)中。加入濃度為150-200ul/cm2生長(zhǎng)面積的Matrigel基質(zhì)。在37℃放置30分鐘，可成膠。可以加入細(xì)胞培養(yǎng)的基質(zhì)，可以是細(xì)胞直接生長(zhǎng)在膠表面。

薄層包被方法：

凍融后，用預(yù)冷的移液槍頭混勻Matrigel基質(zhì)成勻漿狀。根據(jù)使用需要，采用無(wú)血清培養(yǎng)基稀釋Matrigel基質(zhì)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要確定*包被濃度。將稀釋的Matrigel基質(zhì)包被于所需的培養(yǎng)器皿中，包被量至少覆蓋整個(gè)器皿的生長(zhǎng)表面。室溫下孵育1小時(shí)。去除未結(jié)合的Matrigel，用無(wú)血清培養(yǎng)基輕輕地沖洗。用BD細(xì)胞回收劑（354253）或離散酶（354235）可降解Matrigel基質(zhì)，冰浴7小時(shí)候回收得到細(xì)胞。