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Western Blot 原理和操作方法
2013
6-18WesternBlot工作原理蛋白質的電泳分離是重要的生物化學分離純化技術之一,電泳是指帶電粒子在電場作用下,向著與其電荷相反的電極移動的現象.根據所采用的支持物不同,有瓊脂糖凝膠電泳,淀粉凝膠電泳,聚丙烯酰胺凝膠電泳等.其中,聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）由于無電滲作用,樣品用量少（1-100μg）,分辨率高,可檢出10-9-10-12mol的樣品,凝膠機械強度大,重復性好以及可以通過調節單體濃度或單體與交聯劑的比例而得到孔徑不同的凝膠等優點而受到廣泛的應用.SDS-PAG...+ -
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熒光探針Fluo-3/AM和FuraRed測量單細胞中比率鈣
2013
6-18熒光探針Fluo-3/AM和FuraRed測量單細胞中比率鈣中國醫學物理學雜志1999年第3期第16卷實驗研究作者：馬曉冬朱曉亮趙清張瑾張颯雷國華黃行許鮑永耀單位：馬曉冬趙清張瑾張颯雷國華黃行許鮑永耀（*軍醫大學中心實驗室）；朱曉亮（南方醫院皮膚科,廣東廣州510515）關鍵詞：激光掃描共聚焦顯微鏡；Fluo-3/AM；FuraRed；比率鈣...摘要：應用ACAS570激光掃描共聚焦顯微鏡（laserscanningconfocalmicroscope，LSCM簡稱共焦顯微...+ -
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激光掃描共焦顯微鏡原理及其應,細胞上的定位很漂亮
2013
6-18激光掃描共焦顯微鏡（LSCM）是八十年代問世的一種新型分析儀器，由于其高分辨率，高靈敏度，高放大率等特點，在細胞水平上能作多種功能測量和分析，成為分析細胞學的重要研究工具，激光掃描共焦顯微鏡是在顯微鏡基礎上配置激光光源，掃描裝置，共軛聚焦裝置和檢測系統而形成的新型顯微鏡。它對活細胞分層掃描后得到光學切片，可進行細胞三維重建。測量分析細胞形態學參數和熒光強度。利用熒光探針標記LSCM可以對細胞內微細結構和離子的動態變化進行定性、定量、定時和定位分析。LSCM可以進行顯微手術，細...+ -
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流式細胞儀測定血小板胞漿游離鈣濃度
2013
6-18摘要：目的建立流式細胞儀測定血小板胞漿游離鈣離子濃度\[Ca2+\]i的方法。方法用Fluo3AM作為鈣指示劑，在有或無細胞外鈣\[Ca2+\]o存在的條件下，測定靜息和凝血酶激活狀態下人血小板胞漿游離鈣離子濃度\[Ca2+\]i的變化。結果Fluo3AM標記的血小板的平均熒光強度明顯增加。凝血酶使負載Fluo3AM標記的血小板胞漿\[Ca2+\]i明顯增加，且顯示劑量依賴和對\[Ca2+\]o的依賴。結論凝血酶引起血小板胞漿\[Ca2+\]i增加的來源主要是\[Ca2...+ -
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如何選用特殊細胞系培養基？
2013
6-18培養某一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長?？傊琈EM做粘附細胞培養"細胞培養、RPMI-1640做懸浮細胞培養"細胞培養是一個好的開始，各種目的無血清培養AIMV（12005）培養基（SFM）。L-谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎？它在溶液中不穩定嗎？L-谷氨酰胺在細胞培養時是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經過一段時間后會降解，但是確切的降解率一...+ -
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流式細胞術檢測時的樣品制備方法
2013
6-18（一）直接免疫熒光標記法取一定量細胞（約1X106細胞／ml），在每一管中分別加入50μl的HAB，并充分混勻，于室溫中靜置1分鐘以上（）,再直接加入連接有熒光素的抗體進行免疫標記反應（如做雙標或多標染色，可把幾種標記有不同熒光素的抗體同時加入），。孵育20-60分鐘后，用PBS（pH7．2—7．4）洗1-2次，加入緩沖液重懸，上機檢測。本方法操作簡便，結果準確，易于分析，適用于同一細胞群多參數同時測定。雖然直標抗體試劑成本較高，但減少了間接標記法中較強的非特異熒光的干擾，因...+ -
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影響ELISA試驗效果常見分析,和解決思路
2013
6-18ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。我將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來一些啟發，提高試驗質量。操作步驟可能原因解決辦法選擇試劑選擇質量優良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。加樣1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣；2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是...+ -
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ELISA的精點摘要,不要錯過奧
2013
6-18的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異，國內醫學檢驗一般均用板式點。本文將敘述板式ELISA各個操作步驟的注意要點，珠式、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與特殊儀器配合應用，兩者均有詳細的使用說明，嚴格遵照規定操作，必能得出準確的結果。4.1標本的采取和保存可用作ELISA測定的標本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份。有些標...+ -
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免疫熒光制血樣品與視覺享受
2013
6-18一、原理（一）什么是熒光，簡單地講，當用一定波長的光（如紫外光）照射某種物質時，經過照射的物質在極短時間內即可發射出一種可見的光，這種光即為熒光。在生物中，由于產生熒光的方式不同，可以概括地歸納為以下幾種：1．自發熒光：在生物的某些組織中，經紫外線照射后能直接發射出熒光的稱為自發熒光（或直接熒光）。如植物組織中的葉綠素，經紫外線照射后，即可發出紅色熒光。2．次生熒光：有些生物組織經紫外線照射后，并不能發出熒光，但是當它吸收熒光染料后也可以產生熒光，這種稱為次生熒光（或間接熒光...+ -
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免疫組化實驗的小竅門
2013
6-181．固定：用4%的多聚甲醛固定液。對于冰凍切片，甲醛固定有時比冰凍丙酮好；但對于不同的組織和抗原，可選用不同的固定液。有時候商品化的抗體會有比較適合而推薦的固定液，請于購置前注意說明書。BouinS固定液：飽和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其對組織的穿透力較強，固定較好，結構完整，但因偏酸，對抗原有一定損害，且組織收縮明顯，不適于組織標本的長期保存。PLP液：即高碘酸鈉-賴氨酸-多聚甲醛，適于固定石蠟切片。適于富含糖類組織，對超微結構及許多抗原的抗原性保存...+ -
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酶聯方法的標本收集與實驗準備
2013
6-18臨床檢驗常見的標本一般包括血液（指血，靜脈血），尿，糞便，腦脊液，胸腹水，前列腺液，精液，陰道分泌物等，這些標本收集的時間、方法和保存都有一定的要求。（一）臨床標本的收集A、血液標本有些生理因素，如吸煙、進食、運動、情緒波動、妊娠、體位等均可影響血液中某些成分的變化，有些甚至還有晝夜變化。因此血液標本的采集應盡量避免生理因素干擾，以條件一致為宜，如無法避免，應在標本上注明該因素。1．外周血一般選取左手無名指內側采血，該部位應無凍瘡，炎癥，水腫，破損。如該部位不符合要求，以其他...+ -
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ELISA 方法的實驗原理和操作過程.
2013
6-18ELISA是酶聯接免疫吸附劑測定（Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay）的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術之后發展起來的一種免疫酶技術。此項技術自70年代初問世以來，發展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學和醫學科學的許多領域。（一）原理ELISA是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除...+
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